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找到 关键词 包含"表皮葡萄球菌" 8条结果
  • 溴代呋喃酮对胸心外科聚氯乙烯材料表面表皮葡萄球菌生物膜形成的影响

    摘要: 目的 探讨溴代呋喃酮对胸心外科聚氯乙烯(PVC)材料表面表皮葡萄球菌生物膜形成的影响,为生物材料表面改性研究及临床生物材料植入感染的防治提供新思路。 方法 选用化学结构具有代表性的三种溴代呋喃酮分为3组,呋喃酮1组:3,4-二溴基-5-羟基呋喃酮;呋喃酮2组:4-溴-5-(4-甲氧基苯基)-3-(甲氨基) 呋喃酮;呋喃酮3组:3,4-二溴基-5,5-二甲苯基2(5H)呋喃酮;对照组:PVC材料用酒精浸泡5 min;分别对4组PVC材料进行表面涂层改性,将改性过的PVC材料与表皮葡萄球菌共同培育;分别于培养6 h、12 h、18 h和24 h时用激光共聚焦显微镜动态观察PVC材料表面细菌群落及细菌生物膜厚度的形成,扫描电子显微镜观察PVC材料表面细菌生物膜表面结构。 结果 激光共聚焦显微镜观测结果显示:呋喃酮2组各时间点PVC材料表面表皮葡萄球菌群落数量和细菌生物膜厚度明显小于对照组(Plt;0.05),呋喃酮1组、呋喃酮3组表皮葡萄球菌群落数量和细菌生物膜厚度与对照组比较差异无统计学意义(Pgt;0.05)。扫描电子显微镜观察显示: 与对照组比较,呋喃酮2组6 h时PVC材料表面细菌群落附着数量较少;18 h时对照组PVC材料表面细菌生物膜结构初步形成,而呋喃酮2组无明显细菌生物膜结构形成。 结论 不同溴代呋喃酮对PVC材料表面表皮葡萄球菌生物膜形成的影响不同,呋喃酮2可以抑制PVC材料表面表皮葡萄球菌群落数量和细菌生物膜厚度的形成。

    发表时间:2016-08-30 06:02 导出 下载 收藏 扫码
  • 医源性表皮葡萄球菌胞间黏附素基因操纵子在聚氯乙烯材料表面细菌生物膜形成中的作用研究

    目的 表皮葡萄球菌胞间黏附素基因(intercellar adhesion,ica)是细菌聚集的关键因子,通过分析医源性表皮葡萄球菌生物膜基因型,探讨ica 操纵子在聚氯乙烯(polyvinyl chloride,PVC)材料表面细菌生物膜形成中的作用。 方法 取56 株医源性表皮葡萄球菌临床分离株,应用PCR 法、基因测序技术检测细菌生物膜形成相关基因,包括16S rRNA、自溶素(autolysin,atlE)、纤维蛋白原结合蛋白(fibrinogen binding protein,fbe)以及ica。取医源性表皮葡萄球菌制备浓度为1 × 105 cfu/mL 的细菌悬液,并根据目的基因检测结果,分别以icaADB、atlE、fbe 阳性基因型(ica 操纵子阳性组)以及icaADB 阴性而atlE、fbe 阳性基因型(ica 操纵子阴性组)与PVC 材料培养。于6、12、18、24、30 h 各取2 个PVC 材料,进行激光共聚焦显微镜及扫描电镜观察,测量单位视野细菌群落数量及形成的细菌生物膜厚度。 结 果 目 的 基因检测示,医源性表皮葡萄球菌16S rRNA 阳性率为100%(56/56);icaADB、atlE、fbe 阳性基因型菌株占57.1%(32/56);icaADB 阴性而atlE、fbe 阳性基因型菌株占37.5%(21/56)。测序结果示,目的基因16S rRNA、atlE、fbe、icaADB 扩增产物序列分别与GenBank 中基因序列相符。随时间延长,ica 操纵子阴性组的PVC 材料表面无明显细菌生物膜形成;ica 操纵子阳性组的PVC 材料表面细菌群落数量逐渐增多,细菌生物膜体积逐渐增大,24 h 时可见成熟的细菌生物膜结构,30 h 时细菌生物膜体积趋于稳定。培养各时间点ica 操纵子阳性组PVC 材料表面单位视野细菌群落数量(F=435.987,P=0.000)及细菌生物膜厚度(F=6 714.395,P=0.000)明显高于ica 操纵子阴性组,差异均有统计学意义。 结论 医源性表皮葡萄球菌可以分为ica 操纵子阴性和ica 操纵子阳性两类细菌;ica 操纵子可以增加PVC 材料表面细菌生物膜的形成能力、细菌群落数量及细菌生物膜厚度,在PVC 材料表面细菌生物膜形成中具有重要作用。

    发表时间:2016-08-31 05:43 导出 下载 收藏 扫码
  • 乳腺外科表皮葡萄球菌icaA、icaD及聚集相关蛋白基因对细菌生物膜形成的影响

    目的探讨乳腺外科表皮葡萄球菌icaA、icaD和聚集相关蛋白(accumulation-associated protein,aap)基因对细菌生物膜形成的影响。 方法于2011年12月-2013年1月乳腺外科收治的无感染症状女性患者临床标本中分离获得44株表皮葡萄球菌。PCR检测菌株icaA、icaD、aap基因,并根据基因表达结果将其分为icaA+icaD+/aap+组(A组)、icaA+icaD+/aap-组(B组)、icaA-icaD-/aap+组(C组)及icaA-icaD-/aap-组(D组)。取4组菌株制备硅胶材料表面细菌生物膜体外模型,于孵育8、12、24、30、36 h采用结晶紫染色法半定量检测细菌黏附能力,孵育12、24 h激光共聚焦显微镜观测形成的生物膜厚度,孵育24 h扫描电镜观察细菌生物膜超微结构。 结果PCR检测结果示,44株表皮葡萄球菌中,13株为icaA+icaD+/aap+(A组),12株为icaA+icaD+/aap-(B组),16株为icaA-icaD-/aap+(C组),3株为icaA-icaD-/aap-(D组)。共29株(65.9%)形成细菌生物膜,其中A组13株,B组7株,C组9株,D组0株。半定量黏附实验示:孵育8 h,4组细菌黏附能力比较差异无统计学意义(P>0.05);12~36 h时,A、B、C组黏附能力均显著高于D组,A组显著高于B、C组(P<0.05),B、C组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。激光共聚焦显微镜观察示,12、24 h时A、B、C组细菌生物膜厚度均大于D组,A组明显大于B、C组(P<0.05);B、C组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。扫描电镜观察示,孵育24 h时A、B、C组硅胶片表面均可见成熟的细菌生物膜结构,其中A组细菌生物膜分布最广泛、结构最致密、层次最丰富,B、C组细菌生物膜结构相似;D组无明显细菌生物膜形成。 结论icaA、icaD基因及aap基因对表皮葡萄球菌在硅胶表面的细菌生物膜形成均起重要作用,其中aap基因与icaA、icaD基因同时表达的菌株具有最强的细菌生物膜形成能力。

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  • 表皮葡萄球菌生物膜形成相关基因在表皮葡萄球菌和白假丝酵母菌混合生物膜形成中的作用研究

    目的探讨表皮葡萄球菌生物膜形成相关基因——胞间黏附素A(intercellular adhesion A,icaA)基因、纤维蛋白原结合蛋白(fibrinogen binding protein,fbe)基因、聚集相关蛋白(accumulation-associated protein,aap)基因在表皮葡萄球菌和白假丝酵母菌混合生物膜形成中的作用。 方法实验分为3组,用表皮葡萄球菌标准株ATCC35984(表葡组)及白假丝酵母菌标准株ATCC10231(白念组)分别培养及混合培养(混合组),建立表皮葡萄球菌、白假丝酵母菌及二者混合生长的体外生物膜模型。于培养2、4、6、8、12、24、48、72 h,采用结晶紫染色法半定量检测生物膜形成能力,二甲氧唑黄[(2,3 bis (2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)5〔(phenylamino)Carbonyl〕2H-tetrazolium hydroxide assay,XTT]比色法评价生物膜体外生长动力学;24、72 h扫描电镜观察生物膜超微结构。荧光定量PCR分析培养72 h表葡组及混合组icaA、fbe、aap基因表达情况。 结果结晶紫染色法生物膜半定量检测示,混合组和表葡组均在培养12 h生物膜明显增厚,72 h混合组超过表葡组,组间比较除72 h外,其余各时间点两组比较差异均有统计学意义(P<0.05);白念组12 h出现生物膜的生长,在整个培养周期白念组生物膜厚度均低于混合组(P<0.05)。XTT比色法生长动力学检测示,混合组整体生长速度快于白念组,且48 h后超过表葡组;混合组与表葡组除12 h差异有统计学意义(P<0.05)外,其余各时间点比较差异均无统计学意义(P>0.05);混合组培养2、4 h时A值低于白念组,但比较差异无统计学意义(P>0.05);6 h后各时间点A值均显著高于白念组(P<0.05)。扫描电镜观察示,随培养时间延长各组均形成结构复杂、成熟的生物膜。培养72 h荧光定量PCR检测示,与表葡组相比,混合组fbe、icaA、aap基因表达量分别增高1.93、1.52、1.46倍,差异均有统计学意义(P<0.05)。 结论表皮葡萄球菌和白假丝酵母菌混合生长能形成比单一微生物结构更复杂的混合生物膜;混合生物膜较单一微生物生物膜更厚,可能与表皮葡萄球菌icaA、aap、fbe基因表达增加有关。

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  • 乳房假体植入后感染对假体周围纤维包膜形成的影响研究

    目的建立乳房假体细菌感染动物模型,观察感染对假体周围纤维包膜形成的影响,探讨感染与纤维包膜挛缩的相关性。 方法选取健康成年雌性滇南小耳猪3头,随机分为A、B、C组(分别有12、10、12只乳头)。乳房假体植入前,A、B、C组分别于分离的乳房后间隙腔穴内注入无菌PBS液、SE ATCC12228细菌悬液(1.2×105 CFU/mL)和SE RP62A细菌悬液(1.2×105 CFU/mL)各1 mL;之后每只乳房腔穴内植入10 mL无菌硅凝胶假体1枚,3组共植入假体34枚。实验动物术后于清洁环境中饲养13周后取假体周围包膜,用压平式眼压计检测包膜张力,电子天平称量包膜重量;取包膜标本行HE染色观察包膜结构特点并测量包膜厚度,Van-Gieson苦味酸酸性复红染色(VG染色)观察包膜胶原特点,α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)免疫组织化学染色观察包膜肌成纤维细胞。 结果术后切口均愈合,实验动物生命体征平稳。13周后3组假体周围均形成完整纤维包膜,3组间包膜张力比较差异无统计学意义(P>0.05);C组包膜重量明显大于A、B组(P<0.05),A、B组间差异无统计学意义(P>0.05)。HE染色示,3组包膜均可见致密层和疏松层,C组包膜致密层和全层厚度均大于A、B组,差异有统计学意义(P<0.05);A、B组间差异无统计学意义(P>0.05)。VG染色示,C组包膜胶原纤维明显较A、B组致密。α-SMA免疫组织化学染色示,C组包膜的α-SMA阳性表达细胞明显多于A、B组。 结论乳房假体植入后感染对纤维包膜的形成有明显影响,且与包膜挛缩发生、发展相关。

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  • 聚氯乙烯材料表面白色念珠菌-表皮葡萄球菌混合生物膜结构观察

    目的建立聚氯乙烯(polyvinyl chloride,PVC)材料表面白色念珠菌-表皮葡萄球菌混合生物膜体外模型,观察混合生物膜的形成与微观结构。 方法取表皮葡萄球菌(ATCC35984)与白色念珠菌(ATCC10231),分别制备浓度为1×106 CFU/mL的悬液并混合后,与直径0.5 cm PVC膜在胰蛋白胨大豆肉汤(tryptic soy broth,TSB)培养基中共培养形成混合生物膜(实验组)。培养2、6、12、24、48、72 h时取PVC膜,激光共聚焦显微镜检测生物膜厚度、单位视野菌落数,并于48 h时测量生物膜内活菌百分比、三维重建PVC膜表面生物膜图像;扫描电镜观察各时间点混合生物膜结构。以单纯PVC膜置于TSB培养基中培养作为对照组。 结果对照组各时间点PVC材料表面无病原菌黏附。实验组激光共聚焦显微镜观察示,培养6 h时可见菌落及生物膜形成,随时间延长均逐渐增加,24 h时菌落达高峰,48 h时生物膜厚度达峰值。实验组PVC膜表面菌落数比较,2、6、24 h间以及2、6 h与48、72 h间比较差异有统计学意义(P<0.05),24、48、72 h间比较差异无统计学意义(P>0.05);生物膜厚度除48、72 h间比较差异无统计学意义外(P>0.05),其余各时间点间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。培养48 h时,混合生物膜外层活菌百分比明显高于内层及中间层(P<0.05)。三维重建显示混合生物膜表面凹凸不平,突起部分活菌数量较多。扫描电镜观察示,实验组随培养时间增加,PVC膜表面白色念珠菌由孢子状逐渐伸长出现假丝状及菌丝状,表皮葡萄球菌黏附于白色念珠菌周围,逐渐形成复杂的多层次网状混合生物膜。 结论白色念珠菌-葡萄球菌混合培养可在PVC材料表面形成结构复杂的混合生物膜,激光共聚焦显微镜、扫描电镜与三维图像重建技术的结合是研究混合生物膜的理想方法。

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  • 雌二醇对乳腺癌假体植入术后表皮葡萄球菌生物膜形成的影响研究

    目的探讨雌二醇对乳腺癌术后假体表面表皮葡萄球菌生长以及生物膜形成能力及其结构的影响。 方法取表皮葡萄球菌标准株ATCC35984,调整浓度至1×107 CFU/mL或1×108 CFU/mL,与硅胶片和终浓度为125 pmol/L的雌二醇混合培养,制备硅胶材料表面细菌生物膜体外模型。于培养后4、6、12、24、48、72 h,采用结晶紫染色半定量检测硅胶材料表面细菌生物膜形成能力,XTT法检测硅胶材料表面细菌生长动力;根据以上检测结果,选择细菌悬液实验浓度。取实验浓度表皮葡萄球菌ATCC35984悬液以及终浓度为50、125、250、500 pmol/L的雌二醇悬液,分别与硅胶片混合培养制备生物膜体外模型,以未添加雌二醇悬液(0 pmol/L)作为对照;另取实验浓度表皮葡萄球菌ATCC12228悬液,同法制备模型,作为阴性对照。于培养后4、6、12、24、48、72 h同上法检测硅胶材料表面细菌生长动力及生物膜形成能力,扫描电镜观察硅胶材料表面细菌生物膜超微结构;培养6、12、24 h激光共聚焦显微镜观察硅胶材料表面细菌生物膜厚度。 结果根据XTT法及结晶紫染色半定量检测结果,选择浓度为1×107 CFU/mL细菌悬液进行实验。XTT法检测示,ATCC12228和ATCC35984菌株分别在4、6、12、24、72 h和4、6、24、72 h时,其125、250、500 pmol/L组细菌生长速度快于0、50 pmol/L组(P < 0.05),4、6、72 h时500 pmol/L组快于125、250 pmol/L组(P < 0.05),72 h时250 pmol/L组快于125 pmol/L组(P < 0.05),其余组间比较差异无统计学意义(P>0.05);同一时间点两种菌株相同雌二醇浓度组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结晶紫染色半定量检测:各时间点ATCC12228菌株各雌二醇浓度组生物膜形成均为阴性。而ATCC35984菌株培养4 h即有生物膜形成,随时间延长逐渐增厚,24 h时达峰值;培养4、6 h,0 pmol/L组生物膜厚度大于125、250、500 pmol/L组(P < 0.05);12 h开始125 pmol/L组生物膜最厚,与其他组比较差异均有统计学意义(P < 0.05)。激光共聚焦显微镜观察示,ATCC35984菌株在培养6 h时125、250、500 pmol/L组的生物膜厚度小于0、50 pmol/L组(P < 0.05),其余组间比较差异无统计学意义(P>0.05);之后各组生物膜厚度逐渐增加,12、24 h时125 pmol/L组生物膜厚度明显大于其他浓度组(P < 0.05)。扫描电镜观察示,各时间点与其他浓度组相比,125 pmol/L组形成的生物膜结构范围最广,结构最致密、最丰富、层次最多。 结论高浓度雌二醇可促进表皮葡萄球菌生长、生物膜形成和生物膜的成熟。

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  • 表皮葡萄球菌附属基因调节子 C 特异结合多肽对聚氯乙烯材料表面细菌生物膜形成作用的体外研究

    目的探讨表皮葡萄球菌附属基因调节子 C(accessory gene regulator C,agr C)特异结合多肽(简称为 N1)对聚氯乙烯(polyvinyl chloride,PVC)材料表面表皮葡萄球菌生物膜形成作用的体外研究。方法以表皮葡萄球菌 ATCC35984(生物膜表型阳性)和 ATCC12228(生物膜表型阴性)作为研究对象。首先将两菌株分别加入浓度为 100、200、400、800、1 600 μg/mL 的 N1 培养,以相同浓度 agrC 特异结合无关肽(简称为 N0)培养作为对照;24 h 后测定吸光度(A)值,确定 N1 最佳抑菌浓度。两菌株与最佳抑菌浓度的 N1 及 N0 分别培养,6、12、18、24、30、48 h 测定 A 值,观察 N1 对表皮葡萄球菌生物膜形成能力的影响;在此基础上与 PVC 材料片培养 6、12、18、24、30 h,扫描电镜观察 PVC 材料表面生物膜的表面结构;另取与 ATCC35984 菌株培养 6、12、18、24 h 的 PVC 材料片,激光共聚焦显微镜观察生物膜厚度。结果A 值测定显示,N1 对 ATCC35984 菌株最佳抑菌浓度为 800 μg/mL。ATCC12228 菌株与 N1 及 N0 培养后均未形成明显生物膜;ATCC35984 菌株与 N1 及 N0 培养 12 h 时,生物膜形成能力差异有统计学意义(P<0.05),6、18、24、30、48 h 时差异无统计学意义(P>0.05)。扫描电镜观察,ATCC35984 菌株与 N1 及 N0 培养后,随时间延长均见成熟生物膜结构;而 ATCC12228 菌株培养后均未见生物膜形成。激光共聚焦显微镜观察,ATCC35984 菌株与 N1 培养 12 h 时细菌量明显少于与 N0 培养,且以死细菌居多;6、18、24 h 时两种培养条件下细菌数量未见明显差别,均以活细菌居多;同时,N1 培养 12、18 h 时生物膜厚度明显小于 N0 培养(P<0.05)。结论N1 抑制表皮葡萄球菌生物膜形成的强度有量效关系;其在聚集期阻碍细菌的增殖和聚集,抑制生物膜形成,对成熟生物膜抑制作用不明显。

    发表时间:2019-03-11 10:22 导出 下载 收藏 扫码
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