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找到 关键词 包含"异位成骨" 11条结果
  • 壳聚糖/ 亚磷酸化壳聚糖复合海绵复合人脐带间充质干细胞用于异位成骨的实验研究

    目的 通过构建壳聚糖/ 亚磷酸化壳聚糖复合海绵,与人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs)复合构建组织工程骨并行成骨诱导培养,探讨其异位成骨效果,为骨组织工程寻找理想支架材料。 方法 在壳聚糖分子中引入亚磷酸根基团,制备亚磷酸化壳聚糖,并进行表征。分别将浓度为2% 的壳聚糖和亚磷酸化壳聚糖溶液,按1 ∶ 1 体积比混合均匀,构建壳聚糖/ 亚磷酸化壳聚糖复合海绵;然后在模拟体液中进行原位矿化,通过扫描电镜观察矿化前后复合海绵的结构。用酶消化法分离培养hUCMSCs,取生长良好的第3 代细胞与壳聚糖/ 亚磷酸化壳聚糖复合海绵复合培养,构建细胞- 支架复合物,并行成骨诱导培养。成骨诱导培养1、2 周,分别于光镜及扫描电镜下观察细胞黏附情况;培养1、2、3、4、5、6 d 时,MTT 法分析细胞增殖情况。取3 ~ 4 月龄新西兰大白兔40只,雌雄不限,体重2.1 ~ 3.2 kg,平均2.5 kg;制备双侧竖脊肌肌袋,在每只兔右侧肌袋内植入细胞- 支架复合物(A 组,n=40),于其中20 只兔左侧肌袋植入壳聚糖/ 亚磷酸化壳聚糖复合海绵(B 组,n=20),剩余20 只兔左侧肌袋不植入材料(C组,n=20)。术后观察动物一般情况,4 周后处死动物取材,行大体及组织学观察。 结果 亚磷酸化壳聚糖分析表明亚磷酸化反应主要发生在羟基上,其质子类型和化学位移强度与化学结构一致。扫描电镜观察到壳聚糖/ 亚磷酸化壳聚糖复合海绵孔洞均匀,孔壁较薄;原位矿化后孔壁表面有钙磷涂层,晶体颗粒生成;细胞在壳聚糖/ 亚磷酸化壳聚糖复合海绵支架上黏附、生长良好。体内实验大体观察A 组可见细胞- 支架复合物大小、形态基本保持原状,质地有所增韧,材料周围有薄层结缔样组织;B 组复合海绵体积缩小,质地松软;C 组肌袋手术创口已愈合。组织学观察A 组支架材料部分吸收,边缘有均质类骨物质出现,并见成骨细胞;B 组植入区形成圆形空腔,残留壳聚糖支架网络;C 组创面基本愈合,肌肉纤维间可见少量淋巴细胞浸润。 结论 壳聚糖/ 亚磷酸化壳聚糖复合海绵是一种具有良好生物相容性的支架材料,与hUCMSCs 复合构建的组织工程骨在兔体内可异位成骨。

    发表时间:2016-08-31 05:42 导出 下载 收藏 扫码
  • 冻干组织工程骨与组织工程骨成骨活性比较研究

    目的 目前组织工程骨(tissue engineered bone,TEB)缺乏有效可行的储存、运输方法。评估TEB 经过冻干处理后其成骨活性变化及其异位成骨能力,探索新的TEB 储存和运输策略。 方法 取志愿者捐献的骨髓和骨组织分别培养hBMSCs 和制备脱钙骨基质(decalcified bone matrix,DBM),取第3 代hBMSCs 与DBM 复合构建TEB,分别于体外孵育3、5、7、9、12、15 d 经过低温干燥后得到冻干组织工程骨(freeze-dried tissue engineered bone,FTEB),并将体外培养不同时间点的TEB 和FTEB 行扫描电镜观察。Western blot 法检测TEB 和FTEB 内成骨相关蛋白BMP-2、TGF-β1、IGF-1 的变化。将FTEB、TEB 和DBM 分别移植于30 只6 周龄BALB/C 裸鼠皮下进行异位成骨实验(n=10),并行X 线片评分、CT 值检测以及HE 染色观察。 结果 扫描电镜观察示,TEB 中种子细胞保持正常形态,随着培养时间的延长分泌细胞外基质逐渐增加;FTEB 内的种子细胞脱水皱缩而亡,细胞外基质位于疏松的DBM 支架材料中。Westernblot 检测示,TEB 和FTEB 内BMP-2、TGF-β1 和IGF-1 表达均为阳性,除体外培养15 d TEB 和FTEB 的TGF-β1 蛋白积分吸光度(IA)比值比较差异有统计学意义(P lt; 0.05)外,其余各时间点各蛋白含量比较差异均无统计学意义(P gt; 0.05)。移植术后4 周各种移植物未见明显钙化;术后8、12 周,TEB 和FTEB 移植裸鼠皮下可以实现较好的异位成骨。通过X线片评分、CT 值比较移植物钙化程度,TEB 和FTEB 差异无统计学意义(P gt; 0.05),而DBM 未见明显钙化。HE 染色示TEB 和FTEB 出现钙化,DBM 降解吸收。 结论 FTEB 与TEB 具有相似的成骨活性,为TEB 的储存和运输提供了一种新的策略和方法。

    发表时间:2016-08-31 05:48 导出 下载 收藏 扫码
  • 永生化hBMSCs 复合异种骨异位成骨

    目的 为解决组织工程中种子细胞数量不足及为组织工程种子细胞研究提供标准细胞,建立永生化hBMSCs(MSCxj)系,进一步探讨MSCxj 的异位成骨能力。 方法 取冻存复苏后生长良好的第35 代和第128 代MSCxj,扩增培养至2 109 个,分别与牛松质骨复合培养,作为A、B 组(n=12),C 组为单纯牛松质骨(n=12)。成骨诱导培养48 h 和18 d 时行扫描电镜观察细胞在材料上的生长情况。于18 只4 ~ 6 周龄裸鼠背部两侧皮下各作一3 mm小切口,将3 组共36 个标本采用组内随机、组间两两配对分别植入切口内。处死动物前分别行四环素荧光标记。于术后4、8、12周各组分别取4 个标本行HE、丽春红三色、四环素荧光染色、鼠抗人骨钙素单克隆抗体免疫组织化学染色观察,并行形态学定量分析。 结果 细胞- 异种骨复合培养48 h,扫描电镜观察见A、B 组细胞贴附生长良好;18 d 可见大量合成的丝状细胞外基质及细小颗粒样分泌物,并覆盖细胞。裸鼠皮下埋植实验:HE、丽春红三色、四环素荧光染色观察示,术后4 周A、B 组标本成骨不明显,8 周A、B 组标本周边及异种骨内部孔隙有类骨基质沉积,12 周A、B 组标本成骨增加,A、B 组间成骨情况比较无明显差异;C 组各时间点均未见骨质形成。鼠抗人骨钙素单克隆抗体免疫组织化学染色显示,A、B 组8 周及12 周骨陷窝内骨钙素染色呈阳性。形态学定量分析显示,术后8 周A、B组骨长入率分别为5.64% ± 2.68%和4.92% ± 2.95%,术后12 周分别为13.94% ± 2.21% 和14.34% ± 3.46%,两组间比较差异均无统计学意义(P gt; 0.05);组内术后12周骨长入率均高于术后8 周,差异有统计学意义(P lt; 0.05)。 结论 MSCxj 与原代培养hBMSCs 一样具有良好的异位成骨能力,可作为骨组织工程的种子细胞进行相关实验及临床研究。

    发表时间:2016-09-01 09:04 导出 下载 收藏 扫码
  • 预构骨肌皮瓣修复下颌骨和皮肤复合缺损的实验研究

    【摘 要】 目的 探讨BMP-2 与胶原复合材料在骨骼肌中异位成骨预构骨肌皮瓣,修复自体下颌骨和皮肤复合缺损的可行性。 方法 4 ~ 6 周龄新西兰白兔24 只,体重2.0 ~ 2.5 kg,雌雄不拘,随机分成3 组,即实验组、对照组和空白组(n=8)。将BMP-2 与胶原复合,植入兔背阔肌,预构异位新生骨组织,2、4、6 周后行X 线片、ALP、Von Kossa、CD31 免疫组织化学血管标记及组织学观察。6 周后,实验组动物于同侧下颌骨体部制备2 cm × 3 cm 皮肤缺损,并形成直径8 mm 洞穿性骨缺损;以同侧胸背动脉体表投影为皮瓣纵轴,设计含预制新骨组织的背阔肌肌皮瓣,带蒂移位修复下颌骨及皮肤复合缺损。对照组和空白组实验动物下颌骨体部均造成直径8 mm 的洞穿性骨缺损,对照组将复合组织瓣中的骨性部分游离移植修复缺损;空白组缺损不予修复。术后6 周,各组取材行四环素荧光染色、X 线摄片、组织学观察以及新骨计量等,观察骨和皮肤复合缺损修复效果。 结果 BMP-2 与胶原复合材料在兔背阔肌中4 ~ 6 周成骨,胶原材料于植入后3 ~ 5 周降解,成骨过程以软骨成骨为主,新骨形态为编织骨,可见明显的微血管分布。修复自体下颌骨缺损6 周后,实验组皮肤及骨缺损均愈合良好,对照组缺损修复区基本骨化,空白组尚残留大块骨缺损;实验组、对照组及空白组新骨计量分别为(1.594 ± 0.674)、(0.801 ± 0.036)和(0.079 ± 0.010)mm2,组间两两比较,差异均有统计学意义(P lt; 0.05)。 结 论 预构的骨肌皮瓣带血管蒂移位修复兔自体下颌骨和皮肤复合缺损具有可行性和明显优势,有望成为一种血管化骨移植的供区预构形式。

    发表时间:2016-09-01 09:09 导出 下载 收藏 扫码
  • 活性维生素D促组织工程骨血管化

    目的 探讨以1,25-(OH)2 D3为活性因子,与人骨髓间质成骨细胞(human marrowstromal osteoblast, hMSO)、脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell, hUVEC)、珊瑚羟基磷灰石人工骨(coral hydroxyapatite, CHA)联合构建组织工程骨的异位成骨能力和体内快速血管化能力。方法 体外分离、培养hMSO和hUVEC。hMSO以5×105/ml,hUVEC以2.5×105/ml按2∶1比例接种至经1,25-(OH)2 D3处理过的CHA上,为实验组;相同比例hMSO和hUVEC接种于单纯CHA作为对照组。体外培养3 d后,18只裸鼠背部皮下其中6只双侧均植入实验组组织工程骨1块,6只双侧均植入对照组组织工程骨1块,余6只植入实验组及对照组组织工程骨每侧1块。术后4、8、12周后取材,行大体观察、常规组织学、扫描电镜观察,并行植入物成骨的定量判断和新生血管定量分析。结果 组织学观察可见,4周时,各组原始类骨组织均长入支架材料内部,实验组有大量不成熟骨组织伴随众多微血管出现;8周,骨组织成熟与微血管相伴出现;12周,各组均有成熟骨组织出现,实验组有典型骨单位。对照组在各时间点微血管量均少于实验组。扫描电镜观察:4周,实验组大量细胞外基质将细胞包埋,材料表面可见大量微血管并有部分穿入材料内部;对照组虽然细胞外基质也较丰富,但微血管量少;8周,实验组部分材料表面出现了束状条索样的类骨质结构,细胞外基质丰富,可见大量微血管相伴出现;对照组微血管量少,骨组织成熟度亦差。植入物成骨的定量判断,8周实验组为3.10±0.52,对照组为2.30±0.59;12周实验组为4.63±0.55,对照组为3.53±0.62;两时间点两组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。新生血管定量分析,4周实验组为28.74%±7.81%,对照组为19.52%±4.57%;8周实验组为24.66%±7.38%,对照组为17.84%±5.22%;两时间点两组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论1,25-(OH)2 D3作为活性因子通过加强hMSO与hUVEC之间的相互作用,增强了构建的组织工程骨的异位成骨能力和快速血管化能力。

    发表时间:2016-09-01 09:20 导出 下载 收藏 扫码
  • 微包囊优化制备及复合自体微小颗粒骨异位成骨的实验研究

    目的 探讨优化生长因子微包囊制作方法,观察其释放规律和复合微小颗粒骨异位成骨的效果。方法 正交设计优化聚乳酸-羟基乙酸共聚物(poly-DL-lactide-co-glycolide,PLGA)微包囊制作工艺,于2、4、8、12、24、36、48、60、72、84、96、120、144、168、192、216、240和264 h计算微包囊的累计释放量。实验取24只Wistar大鼠,随机分为4组(n=6),每只大鼠于双侧股部作1 cm切口,制备臀大肌肌袋模型。A组双侧植入胶原,B组双侧植入胶原和颗粒骨,C组双侧植入胶原和重组人骨形成蛋白2(recombinant human bone morphogenetic protein 2,rhBMP-2)/PLGA缓释微包囊;D组双侧植入胶原、颗粒骨与rhBMP-2/PLGA缓释微包囊。于术后3、4和5周取样(n=2)行大体和组织学观察。结果 各优化变量对微包囊粒径及其包封率均有影响,包囊表面光滑, 成球较好。体外能够在11 d内缓慢释放。术后3周大体观察,A组未触及移植物,B、C、D组可触及,微包囊呈白色颗粒包裹于组织中。组织学观察:术后3周,A组胶原已经完全吸收,其余3组可见残余胶原;术后4周,A组胶原已不易见到,B组可见微小颗粒骨继续吸收,体积变小;C组包囊体积缩小,囊间成骨性细胞增多;D组微小颗粒骨和微包囊继续吸收,成骨性细胞和软骨性细胞团增多;术后5周,B、C、D组均可见植入物体积减小,包囊被吸收破碎,但颗粒骨和包囊周围的软骨性细胞、成骨性细胞更加密集。结论 优化PLGA微包囊制备工艺,使其在体外能够长时间缓释。自体微小颗粒骨可在臀大肌肌袋内异位诱导生成大量成骨性细胞,PLGA微包囊可以与其有机复合,并在减少生长因子用量的同时协同微小颗粒骨成骨。

    发表时间:2016-09-01 09:20 导出 下载 收藏 扫码
  • 珍珠层聚乳酸人工骨复合成骨细胞体内异位成骨研究

    目的 探讨珍珠层聚乳酸(nacre/polylactic acid,N/P)人工骨与同种异体成骨细胞复合,植入体内后异位成骨的作用机制,以及作为骨组织工程支架材料的可行性。方法 成年雄性新西兰大白兔18只,按2、4和8周3个时间点随机分成3组,每组6只。将体外培养的同种异体新西兰大白兔成骨细胞,种植到N/P人工骨材料上,并植入每只兔左侧背部皮下为实验组;以不复合成骨细胞的N/P人工骨材料植入右侧背部皮下作对照,分别于植入后不同时间点取材,经大体观察、组织学检查和免疫组织化学方法检测。结果 实验组2周时材料周围有少许炎性细胞聚集,4周时有类骨质形成,8周时有成熟骨组织形成,其中可见骨髓腔;对照组2、4周时仅见大量纤维组织长入材料内,8周时材料内纤维组织增多,但无成骨发生。结论 N/P人工骨可作为理想的骨组织工程支架材料。

    发表时间:2016-09-01 09:29 导出 下载 收藏 扫码
  • 陶瓷样异种骨复合骨髓异位成骨的实验研究

    目的 了解陶瓷样异种骨(CXB)与骨髓(BM)复合移植的成骨作用。方法 将CXB与BM复合及单纯CXB植入兔的骶棘肌内,术后2、4、8、12、16及24周取出植入材料作组织学及组织化学检查,观察植入材料的成骨作用。结果 CXB与BM复合植入后2周开始有软骨和新骨生成,以后软骨逐渐钙化成骨,8周时出现髓腔,并随植入时间的延长,新骨生成增多,成骨更为典型。而单纯CXB植入后无新骨或软骨形成。结论 CXB与BM复合移植通过骨传导、骨诱导及提供成骨细胞或成软骨细胞而成骨,是一种理想的骨移植替代材料,可望在临床上用于骨缺损的修复。

    发表时间:2016-09-01 11:04 导出 下载 收藏 扫码
  • 重组人BMP-2/壳聚糖/硫酸葡聚糖复合微球诱导异位成骨的micro-CT评价

    目的采用micro-CT评价重组人BMP-2/壳聚糖/硫酸葡聚糖(recombinant human BMP-2/ chitosan /dextran sulfate,rhBMP-2/CS/DS)复合微球诱导异位成骨情况。 方法采用离子交联法制作rhBMP-2/CS/DS复合微球,扫描电镜观察其形态,ELISA法检测微球体外缓释效应。取6~8周龄雄性SD大鼠48只,随机分为4组(n=12);制备股四头肌肌袋模型后,分别将相同体积明胶海绵(A组)、CS/DS微球(B组)、rhBMP-2(C组)及rhBMP-2/CS/DS复合微球(D组)植入肌袋肌间隙中。术后观察大鼠一般情况;于4、8、12、16周处死动物,取异位骨化组织块行micro-CT扫描及三维重建,检测组织骨密度(tissue mineral density,TMD)、骨体积分数(bone volume fraction,BVF)、骨小梁厚度(trabecular thickness,Tb.Th)、骨小梁数量(trabecular number,Tb.N)、皮质骨骨密度(bone mineral density,BMD)及组织矿含量(tissue mineral content,TMC)。 结果扫描电镜观察示,制备的rhBMP-2/CS/DS复合微球球形较规整,分散较均匀,无团聚,微球表面较光滑;微球体外释放rhBMP-2于2 h后出现1个突释放期,2 d时达峰值,释放周期约20 d。各组大鼠均存活至实验完成,术后各时间点,A、B组CT扫描均未见放射性显影,三维重建未发现成骨;而C、D组放射性显影强度及三维重建骨组织逐渐增加,且D组强于C组。各时间点A、B组TMD、BVF、Tb.Th、Tb.N、BMD及TMC均为0。随时间延长,C、D组除Tb.N外,其余骨组织参数均呈总体增加趋势,各时间点与A、B组比较差异均有统计学意义(P < 0.05);C、D组间4周时比较差异无统计学意义(P>0.05),8~16周时D组显著高于C组,比较差异有统计学意义(P < 0.05)。 结论rhBMP-2/CS/DS复合微球异位诱导成骨能力显著强于单独rhBMP-2。

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  • 载 BMP-2 多肽 P24 的巯基化壳聚糖水凝胶诱导异位成骨的实验研究

    目的探讨载 BMP-2 多肽 P24 的巯基化壳聚糖(chitosan-4-thio-butylamidine,CS-TBA)水凝胶的异位成骨能力及体内生物相容性。方法采用壳聚糖、2-亚氨基硫烷盐酸盐、羟基磷灰石(hydroxyapatite,HA)制备 CS-TBA/HA 溶液,进一步加入 P24 多肽制备 CS-TBA/5%P24/HA、CS-TBA/10%P24/HA 溶液;取上述 3 种溶液,加入 β-甘油磷酸二钠(β-glycerophosphate disodium,β-GP),获得 CS-TBA/HA/β-GP、CS-TBA/5%P24/HA/β-GP、CS-TBA/10%P24/HA/β-GP 水凝胶。取雌性 SD 大鼠 18 只,随机分为 A、B、C 3 组(n=6),制备竖脊肌肌袋后,分别植入 CS-TBA/HA/β-GP 水凝胶(A 组)、CS-TBA/5%P24/HA/β-GP 水凝胶(B 组)、CS-TBA/10%P24/HA/β-GP 水凝胶(C 组)。术后观察大鼠存活情况,4、8 周取材采用 micro-CT 检测标本骨小梁厚度(trabecular thickness,Tb.Th)、骨小梁数量(trabecular number,Tb.N)、皮质骨骨密度(bone mineral density,BMD),组织学观察(HE、Masson 染色)分析材料的生物降解性及成骨作用。结果术后各组大鼠均存活至取材时间点。micro-CT 显示,术后随时间延长,各组新生骨逐渐增多;同一时间点 B、C 组较 A 组明显,且随着 P24 浓度的增加,C 组新生骨形成更多。术后各组 Tb.Th、Tb.N、BMD 逐渐增加,除 A 组 Tb.Th 外,其余各指标 4 周与 8 周间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。各时间点,B、C 组 Tb.Th、Tb.N、BMD 明显高于 A 组,C 组高于 B 组,比较差异均有统计学意义(P<0.05)。组织学染色观察示,B、C 组材料具有良好的生物降解性,且成骨效果随 P24 浓度升高而增强。结论P24 多肽有助于提升 CS-TBA 水凝胶的异位成骨作用,且 10% 浓度效果更强。

    发表时间:2018-09-03 10:13 导出 下载 收藏 扫码
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