• 承德医学院附属医院口腔科(河北承德 067000);
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目的  制备负载TGF-β3及BMSCs的Pluronic F-127复合凝胶,观察其体内、外成骨及成血管作用。方法  取新西兰大白兔胫骨及股骨骨髓,分离培养BMSCs并传代,取第3代细胞经成骨、成脂诱导培养鉴定后用于后续实验。采用L-DMEM培养基溶解Pluronic F-127粉末、TGF-β3,分别制备 Pluronic F-127凝胶、TGF-β3+Pluronic F-127凝胶、BMSCs+Pluronic F-127凝胶、TGF-β3+BMSCs+Pluronic F-127凝胶。取第3代BMSCs,分别采用L-DMEM培养基(A组)、成骨诱导液(B组)、含Pluronic F-127凝胶的成骨诱导液(C组)、含TGF-β3+Pluronic F-127凝胶的成骨诱导液(D组)培养14 d后,ALP染色和茜素红染色观测成骨情况;另采用含Pluronic F-127凝胶的L-DMEM培养基(实验组)、L-DMEM培养基(对照组)培养1、2、3、4 d,MTT法检测细胞增殖情况。取10只新西兰兔制备上颌窦提升模型后,于每只兔骨缺损处注入Pluronic F-127凝胶(A组)、TGF-β3+Pluronic F-127凝胶(B组)、BMSCs+Pluronic F-127凝胶(C组)、TGF-β3+BMSCs+Pluronic F-127凝胶(D组),于第8周取材行影像学检查、HE染色观察新骨形成情况,免疫组织化学染色观察骨组织VEGF及BMP-2表达情况,Western blot检测骨组织VEGF、抑瘤素M(oncostatin M,OSM)及BMP-4蛋白表达。结果  成骨、成脂诱导鉴定示分离培养细胞为BMSCs。体外实验染色显示D组ALP活性及茜素红浓度高于其他组(P<0.05);MTT法检测示随着时间延长,两组吸光度(A)值均逐渐升高,各时间点组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。体内实验影像学检查示D组成骨密度及成骨连续性最好,新骨体积占比优于其他组(P<0.05);HE染色示与其他组比较,D组骨小梁致密且排列规则,其上分布大量成骨细胞和破骨细胞,可见大量新骨形成;免疫组织化学染色示D组BMP-2、VEGF呈强阳性表达(P<0.05);Western blot检测D组VEGF、OSM及BMP-4蛋白相对表达量高于其他组(P<0.05)。结论  负载TGF-β3及BMSCs的Pluronic F-127复合凝胶中的BMSCs能被诱导分化为成骨细胞,并且复合凝胶对细胞无毒性,在兔上颌窦内有明显成骨及成血管效果。

引用本文: 张艳波, 王雪峰, 韩尚志, 张兴乐, 王鹏, 霍峰. 负载TGF-β3及BMSCs的Pluronic F-127复合凝胶在兔上颌窦提升中成骨及成血管作用的研究. 中国修复重建外科杂志, 2021, 35(11): 1472-1478. doi: 10.7507/1002-1892.202106005 复制

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