• 遵义医学院附属医院烧伤整形科(贵州遵义  563000);
导出 下载 收藏 扫码 引用

目的 研究人羊膜间充质干细胞外泌体(human amniotic mesenchymal stem cell exosome,hAMSC-Exo)中的微小 RNA-135a(microRNA-135a,miR-135a)对成纤维细胞迁移的作用。方法 用外泌体分离试剂盒提取 hAMSC-Exo 并进行鉴定,划痕实验检测 hAMSC-Exo 对成纤维细胞迁移的作用。实时荧光定量 PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)检测过表达 miR-135a 后 hAMSC-Exo 中 miR-135a 基因相对表达量,划痕实验检测过表达和敲减 miR-135a 后 hAMSC-Exo 对成纤维细胞迁移的作用,Western blot 检测过表达和敲减 miR-135a 后 hAMSC-Exo 成纤维细胞迁移相关蛋白[大分子肿瘤抑制因子 2(large tumor suppressor 2,LATS2)、E-钙黏着蛋白(E-cadherin)、N-cadherin、α 平滑肌肌动蛋白(α smooth muscle actin,α-SMA)]的相对表达量;均以 293T 细胞外泌体及 hAMSC-Exo 作为对照。结果 成功获得 hAMSC-Exo;划痕实验检测示,hAMSC 组促进成纤维细胞迁移能力最强,GW4869(外泌体抑制剂)处理 hAMSC 组促进成纤维细胞迁移能力减弱。qRT-PCR 检测示过表达 miR-135a 后,hAMSC-Exo 中 miR-135a 基因相对表达量明显增加。划痕实验检测示,过表达 miR-135a 后,hAMSC-Exo 促进成纤维细胞迁移能力增强;而敲减 miR-135a 后,hAMSC-Exo 促进成纤维细胞迁移能力减弱。Western blot 检测成纤维细胞迁移相关蛋白显示,与 293T 细胞外泌体组比较,各 hAMSC-Exo 处理组均下调 E-cadherin、N-cadherin 和 LATS2 表达,上调 α-SMA 表达;其中过表达 miR-135a 后,hAMSC-Exo 能力增强,敲减 miR-135a 后,hAMSC-Exo 能力较过表达 miR-135a 组下降。结论 hAMSC-Exo 中的 miR-135a 可促进成纤维细胞迁移,抑制 E-cadherin、N-cadherin 和 LATS2 表达,促进 α-SMA 表达。

引用本文: 陈涛, 高绍莹, 郝艺, 张菲菲, 唐修俊, 魏在荣, 王达利, 祁建平. 人羊膜间充质干细胞外泌体通过微小 RNA-135a促进成纤维细胞迁移实验研究. 中国修复重建外科杂志, 2020, 34(2): 234-239. doi: 10.7507/1002-1892.201907136 复制

  • 上一篇

    人脂肪源细胞外囊泡联合脱细胞脂肪组织支架构建组织工程脂肪
  • 下一篇

    长链非编码 RNA MALAT1 吸附微小 RNA-124 调控 MSCs 成骨分化的实验研究