• 1. 漯河医学高等专科学校医疗系(河南漯河 462002);
  • 2. 广州中医药大学针灸康复临床医学院(广州 510006);
  • 3. 漯河医学高等专科学校第三附属医院儿科(河南漯河  462002);
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目的 探讨 SN50 定向诱导小鼠小胶质细胞分化对缺氧损伤神经元的修复作用及其机制。方法 取新生 BALB/c 小鼠脑组织,采用差速贴壁结合震荡方法分离神经元和小胶质细胞。小胶质细胞首先采用免疫荧光染色鉴定特异性表达蛋白诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthetase,iNOS)和电离钙离子结合调节因子 1(ionized calcium binding adapter molecule 1,Iba1)表达情况,实时荧光定量 PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)检测特异性表达基因 iNOS、CD32 和 IL-10;然后采用 SN50 处理后,Western blot 检测 SN50 对小胶质细胞 NF-κB 的调控,qRT-PCR 检测小胶质细胞相关分化基因(iNOS、CD11b、IL-10、CD206)表达,流式细胞术检测 SN50 对小胶质细胞凋亡的影响,以上检测均以蒸馏水处理的小胶质细胞作为对照。神经元首先行缺氧损伤处理,分别于缺氧处理 0、2、6、12、24、48 h 后 MTT 检测神经元活力,另取缺氧处理 12 h 神经元经 Western blot 检测凋亡相关蛋白 Bcl-2 和半胱氨酸蛋白酶 3(Caspase-3)的表达、流式细胞术检测神经元凋亡情况。最后,将缺氧损伤 12 h 神经元分别与无菌蒸馏水(对照组)和 SN50(实验组)处理的小胶质细胞共培养 24 h,MTT 检测细胞活力、Western blot 检测细胞凋亡相关蛋白(Bcl-2、Caspase-3)表达、流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果 免疫荧光染色和 qRT-PCR 鉴定震荡分离的细胞表达小胶质细胞特异性蛋白和基因。与正常小胶质细胞相比,SN50 处理小胶质细胞后 NF-κB 蛋白及指示向 M1 型分化特异性基因 iNOS、CD11b 相对表达量降低(P<0.05),向 M2 型分化特异性基因 IL-10 和 CD206 相对表达量提高(P<0.05),但细胞凋亡率无明显改变(P>0.05)。与正常神经元相比,神经元缺氧处理后活力显著下降,Bcl-2、Caspase-3 蛋白相对表达量降低,而 cleaved-Caspase-3 蛋白相对表达量提高,神经元凋亡率明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。小胶质细胞与神经元共培养后,与对照组相比,实验组细胞活力及 Bcl-2、Caspase-3 蛋白相对表达量明显升高,cleaved-Caspase-3 蛋白相对表达量以及细胞凋亡率降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 SN50 可以通过 NF-κB 信号通路诱导小胶质细胞向 M2 型分化,使小胶质细胞对缺氧受损神经元发挥修复作用。

引用本文: 韩芳芳, 刘春龙, 杨常青, 孙元华. SN50 定向诱导小鼠小胶质细胞分化促进缺氧损伤神经元修复的实验研究. 中国修复重建外科杂志, 2020, 34(4): 509-517. doi: 10.7507/1002-1892.201905131 复制

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