• 南昌大学第二附属医院整形美容科(南昌 330006);
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目的 探讨脂肪干细胞来源外泌体(adipose-derived stem cell released exosomes,ADSC-Exos)对糖尿病小鼠创面愈合的影响。方法 取患者自愿捐赠脂肪组织,采用酶消化法分离培养 ADSCs,并于第 3 代细胞上清液提取 Exos(ADSC-Exos);透射电镜观察 ADSC-Exos 形态,Western blot 检测膜表面标志性蛋白 Alix、CD63,纳米颗粒跟踪分析仪检测粒径分布。取患者自愿捐赠皮肤组织,采用酶消化法分离培养成纤维细胞。将 PKH26 标记的 ADSC-Exos 与第 5 代成纤维细胞培养,共聚焦荧光显微镜观察其能否进入细胞,采用细胞计数试剂盒 8(cell counting kit 8, CCK-8)及划痕法观察 ADSC-Exos 对成纤维细胞增殖及迁移的影响。取 24 只 8 周龄 Balb/c 雄性小鼠制备糖尿病模型后,背部制备直径 8 mm 全层皮肤缺损创面,实验组(n=12)及对照组(n=12)创面真皮层分别注射 0.2 mL ADSC-Exos 及 PBS。第 1、4、7、11、16、21 天大体观察创面愈合情况,计算创面愈合率;第 7、14、21 天取材,行组织学(HE 及 Masson)及 CD31 免疫组织化学染色,观察创面结构、胶原纤维及新生血管情况。结果 ADSC-Exos 为边缘清晰、大小分布均匀的膜性囊泡;粒径为 40~200 nm,平均 102.1 nm;膜表面标志性蛋白 Alix、CD63 均呈阳性。ADSC-Exos 与成纤维细胞复合培养观察示,ADSC-Exos 可进入成纤维细胞胞内,并能促进成纤维细胞增殖及迁移。动物实验显示,实验组小鼠背部创面愈合明显快于对照组,各时间点创面愈合率差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,实验组创面结构愈合更好,愈合前期新生微血管更多,愈合后期胶原纤维沉积更多;其中,第 7、14、21 天创面缺损长度,第 7、14 天微血管数量,第 14、21 天胶原纤维沉积百分比,组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 ADSC-Exos 通过促进创面血管新生以及成纤维细胞增殖、迁移和胶原合成来促进糖尿病小鼠创面愈合。