• 1. 河南省省立医院骨科(郑州 450000);
  • 2. 河南省胸科医院骨科(郑州  450003);
  • 3. 重庆医科大学附属第一医院骨科(重庆 400042);
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目的探讨内质网应激对吸烟诱导的髓核细胞凋亡与炎性反应的影响。方法以 2016 年 10 月—2018 年 10 月 25 例接受椎间盘摘除术的颈椎间盘突出症患者为研究对象,分为吸烟组(14 例)和非吸烟组(11 例)。两组患者年龄、性别、突出节段、Pfirrmann 分级比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。将术中获取的髓核组织,行 TUNEL 染色和 Western blot 检测,观察细胞凋亡情况。然后,采用酶序贯消化法分离培养髓核细胞并传代,取第 3 代细胞行 ELISA 检测炎性因子 IL-1β 和 TNF-α 含量,免疫荧光染色观察细胞中 P65 核转移情况,Western blot 检测内质网应激相关蛋白 GRP78 和 CHOP 表达,透射电镜观察细胞内质网超微结构。最后,为验证内质网调控作用,采用特异性抑制剂 4-PBA 处理吸烟组髓核细胞后,Western blot 检测 GRP78、CHOP、IL-1β、TNF-α 及 P65 蛋白相对表达量,流式细胞术检测细胞凋亡率;并以吸烟组未作处理的髓核细胞作对照。结果髓核组织观测显示,吸烟组细胞凋亡率及 Caspase-3 和 PARP 蛋白相对表达量均明显高于非吸烟组(P<0.05)。髓核细胞观测显示,吸烟组髓核细胞分泌 IL-1β、TNF-α 水平以及 GRP78、CHOP 蛋白相对表达量均明显高于非吸烟组(P<0.05);免疫荧光染色示吸烟组细胞 P65 主要表达在细胞核,而非吸烟组在细胞质;透射电镜显示,与非吸烟组相比,吸烟组内质网处于应激损伤状态。吸烟组髓核细胞经 4-PBA 处理后,GRP78、CHOP、IL-1β、TNF-α 及 P65 蛋白相对表达量以及细胞凋亡率均较处理前明显降低(P<0.05)。结论吸烟可通过内质网应激导致髓核细胞凋亡和炎性反应加剧,抑制内质网应激有望成为延缓吸烟导致椎间盘退变的新靶点。

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