• 四川大学华西医院骨科(成都 610041);
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目的 从外周血中分离获取外周血来源间充质干细胞(peripheral blood mesenchymal stem cells,PBMSC)和外周血内皮祖细胞(peripheral blood endothelial progenitor cells,PBEPC),构建复合细胞膜片并初步研究其生物学特性。方法 抽取健康成年新西兰大白兔外周血,采用密度梯度离心法分离获取 PBMSC 和 PBEPC,分别行形态学观察及鉴定。取第 3 代 PBMSC 和 PBEPC 以 1∶1 比例进行成膜诱导形成复合细胞膜片,取单纯第 3 代 PBMSC 同法制备单一细胞膜片。取两种细胞膜片行 HE 染色,观察细胞膜片内细胞分布情况;分别对两种细胞膜片行成骨诱导,收集诱导 1、5、10 d 的上清液,利用 ELISA 法检测两种细胞膜片上清液内 ALP、骨钙素(osteocalcin,OCN)和 VEGF 的表达情况。结果 PBMSC 细胞形态单一,呈纺锤形或多角形,具备良好的成骨、成脂分化能力;PBEPC 细胞形态单一,呈铺路石样,成管试验阳性。两种细胞膜片均呈白色半透明膜状物。HE 染色示,与单一细胞膜片组相比,复合细胞膜片组膜片更厚,具备更多细胞层数及更高的细胞密度。ELISA 法检测示,随诱导时间延长,两组细胞膜片上清液中 ALP、OCN 和 VEGF 表达量均有所增加。复合细胞膜片组诱导培养 5、10 d OCN 表达量显著高于单一细胞膜片组,10 d ALP 表达量显著高于单一细胞膜片组,1、5、10 d VEGF 表达量均显著高于单一细胞膜片组,差异均有统计学意义(P<0.05);其余各时间点两组间各蛋白表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 PBMSC 具备稳定的 MSCs 分化能力,因其取材微创具备良好的应用前景。通过与 PBEPC 共培养、成膜诱导等手段构建复合细胞膜片,为组织缺损的修复提供了一种新的思路与探索。

引用本文: 邢飞, 段鑫, 刘明, 陈家磊, 龙成, 陈然, 孙嘉辰, 吴双, 陈力, 项舟. 外周血来源间充质干细胞/内皮祖细胞复合细胞膜片的构建及其生物学特性初步研究. 中国修复重建外科杂志, 2020, 34(1): 109-115. doi: 10.7507/1002-1892.201901087 复制

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