• 重庆医科大学附属儿童医院整形外科 儿童发育疾病研究教育部重点实验室 儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地 儿科学重庆市重点实验室(重庆 400014);
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目的  探讨 2, 3, 7, 8-四氯二苯二英(2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin,TCDD)致胎鼠腭裂模型中 miR-381-3p 下调与胎鼠腭间充质(mouse embryonic palatal mesenchymal,MEPM)细胞成骨分化抑制的相关性。方法  32 只 6~8 周龄 SPF 级建康 C57BL/6J 孕鼠随机分为 TCDD 组与对照组,每组 16 只。于胚胎日第 10.5 天(embryonic day 10.5,E10.5)时,TCDD 组一次性灌胃 TCDD(28 μg/kg)、对照组给予等量玉米油。于 E13.5 和 E14.5 取出两组胎鼠大体观察腭突组织后,取 E13.5 和 E14.5 腭突组织行实时荧光定量 PCR 检测 miR-381-3p 表达;E14.5 腭突组织 Western blot 检测成骨特异性转录因子 RUNX2 和骨桥蛋白(osteopontin,OPN)的表达。取对照组 E14.5 胎鼠腭突分离培养 MEPM 细胞,取第 3 代细胞以含 10 nmol/L TCDD 的完全培养基培养,于 0、0.5、1、2、3 d 检测 miR-381-3p 表达,0、1、2、3 d 检测 RUNX2 和 OPN 蛋白表达。另取第 3 代 MEPM 细胞随机分为 4 组,沉默表达组及对照组分别转染 miR-381-3p 抑制物及抑制物对照,过表达组及对照组分别转染 miR-381-3p 模拟物及模拟物对照。转染 48 h 后,检测各组 miR-381-3p 及 RUNX2 和 OPN 蛋白表达。结果  E13.5 和 E14.5 时对照组获得活胎鼠 96 只、TCDD 组 92 只;其中,E14.5 对照组活胎鼠可见双侧腭突接触,TCDD 组双侧腭突中间有间隙。TCDD 组胎鼠腭突组织 miR-381-3p 以及 RUNX2、OPN 蛋白相对表达量均明显低于对照组(P<0.05)。TCDD 处理 MEPM 细胞 0.5 和 1 d 后 miR-381-3p 相对表达量较 0 d 时明显下降(P<0.05),2、3 d 时表达量明显上升,与 0 d 时比较差异无统计学意义(P>0.05);1、2、3 d 时 RUNX2 及 OPN 蛋白相对表达量均较 0 d 时显著降低(P<0.05)。MEPM 细胞转染 48 h 后,沉默表达组 miR-381-3p 及 RUNX2、OPN 蛋白相对表达量均较其对照组下降,过表达组均较其对照组升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论  在 TCDD 致胎鼠腭裂模型中,miR-381-3p 表达下调可能抑制胎鼠 MEPM 细胞成骨分化。

引用本文: 蒋亨, 袁心刚, 傅跃先. TCDD 致胎鼠腭裂模型中 miR-381-3p 下调抑制腭间充质细胞成骨分化的实验研究. 中国修复重建外科杂志, 2019, 33(9): 1174-1180. doi: 10.7507/1002-1892.201901028 复制

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