• 1. 济宁医学院附属金乡医院骨科(山东济宁 272200);
  • 2. 济宁医学院附属金乡医院放射科(山东济宁 272200);
  • 3. 济宁市第一人民医院骨科(山东济宁  272200);
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目的 初步研究瑞香素(dephnetin,DAP)联合 IGF-1 基因转染对大鼠脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells,ADSCs)成软骨分化的影响。方法 采用酶消化法分离培养大鼠 ADSCs。取第 3 代 ADSCs 以 IGF-1 基因转染作为实验组,未转染的 ADSCs 作为对照组。两组细胞分别用不同浓度 DAP(0、30、60、90 μg/mL)处理,培养 72 h 后采用细胞计数试剂盒 8(cell counting kit 8,CCK-8)法检测细胞增殖活性;培养 14 d 分别采用实时荧光定量 PCR 和 Western blot 检测Ⅱ型胶原和蛋白聚糖(Aggrecan)mRNA 和蛋白表达,并行甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原免疫组织化学染色观察。结果 CCK-8 法检测示,随 DAP 作用浓度增加,对照组和实验组细胞吸光度(A)值均逐渐增加(P<0.05);相同 DAP 浓度下,实验组细胞A值显著高于对照组(P<0.05)。实时荧光定量 PCR 和 Western blot 检测示,随 DAP 作用浓度增加,对照组细胞Ⅱ型胶原和 Aggrecan 的 mRNA 和蛋白相对表达量无明显变化,各浓度组间差异无统计学意义(P>0.05);实验组细胞Ⅱ型胶原和 Aggrecan 的 mRNA 和蛋白相对表达量逐渐增加,其中 60、90 μg/mL DAP 浓度组显著高于 0 μg/mL DAP 浓度组(P<0.05)。相同 DAP 浓度下,实验组细胞Ⅱ型胶原和 Aggrecan 的 mRNA 和蛋白相对表达量显著高于对照组(P<0.05)。甲苯胺蓝染色示,随 DAP 作用浓度增加,对照组内和实验组内细胞着色无明显差异;相同 DAP 浓度下,实验组比对照组细胞着色略深。Ⅱ型胶原免疫组织化学染色示,随 DAP 作用浓度增加,对照组细胞的细胞质内着色无明显差异;实验组细胞的细胞质内着色逐渐加深,其中 60、90 μg/mL DAP 浓度组明显深于 0 μg/mL DAP 浓度组。相同 DAP 浓度下,实验组比对照组细胞着色明显加深。结论 DAP 对大鼠 ADSCs 增殖有一定促进作用;单独使用 DAP 诱导大鼠 ADSCs 向软骨细胞分化作用极微弱,但 DAP 联合 IGF-1 基因转染有明显协同作用,促进 ADSCs 成软骨分化。

引用本文: 申宁, 席晓云, 李飞, 吕超亮, 张普晟. 瑞香素联合IGF-1对大鼠脂肪间充质干细胞成软骨分化的影响. 中国修复重建外科杂志, 2019, 33(6): 743-749. doi: 10.7507/1002-1892.201812063 复制

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