• 1. 湖南中医药大学附属常德医院 常德市第一中医医院骨伤科脊柱病区(湖南常德 415000);
  • 2. 南方医科大学珠江医院脊柱外科(广州 510282);
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目的 探讨 TGF-β1 诱导的黄韧带细胞增生效应及其对结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)表达的影响。方法 取腰椎椎间盘突出髓核摘除术中的黄韧带组织,采用胶原酶预消化组织块培养法分离培养黄韧带细胞。采用形态学观察、免疫荧光染色观察、MTT 法检测细胞增殖情况进行细胞鉴定。取第 3 代黄韧带细胞分为 5 组,A、B、C、D 组分别于细胞中加入 3 ng/mL TGF-β1、50 ng/mL CTGF、3 ng/mL TGF-β1+CTGF 中和抗体(1∶500)封闭、50 ng/mL CTGF+CTGF 中和抗体(1∶500)封闭,E 组加入无血清 DMEM 作为对照。采用 MTT 法检测 TGF-β1 和 CTGF 对黄韧带细胞增殖的影响,Western blot 检测 CTGF 蛋白表达,实时荧光定量 PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)检测Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、CTGF 基因表达。结果 培养的黄韧带细胞形态呈多样性,均表现出典型的黄韧带成纤维细胞表型;所有细胞均表达Ⅰ型胶原蛋白及波形蛋白,部分细胞表达Ⅲ型胶原蛋白;MTT 鉴定示随培养时间延长,各代细胞吸光度(A)值均逐渐增加,同代细胞各时间点间 A 值比较差异均有统计学意义(P<0.05),相同时间点各代细胞间 A 值比较差异均无统计学意义(P>0.05)。培养 24 h MTT 法检测示 A、B 组细胞 A 值显著高于 E 组(P<0.05);而加入 CTGF 中和抗体后,C、D 组 A 值降低,但仍高于 E 组(P<0.05);A、C 组间及 B、D 组间比较差异亦有统计学意义(P<0.05)。Western blot 检测示 A、B 组 CTGF 蛋白相对表达量明显高于 E 组(P<0.05);而加入 CTGF 中和抗体后,C、D 组 CTGF 蛋白相对表达量显著降低,但仍高于 E 组(P<0.05);A、C 组间及 B、D 组间比较差异亦有统计学意义(P<0.05)。qRT-PCR 检测示,与 E 组比较,A 组 CTGF、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原 mRNA 相对表达量均显著增高(P<0.05);加入 CTGF 中和抗体后,C 组各基因表达受到抑制,mRNA 相对表达量显著低于 A 组,但仍显著高于 E 组(P<0.05)。B 组Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原 mRNA 相对表达量显著高于 E 组(P<0.05),但 CTGF mRNA 相对表达量与 E 组比较差异无统计学意义(P>0.05);加入 CTGF 中和抗体后,D 组Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原 mRNA 相对表达量受到抑制,低于 B 组,但仍显著高于 E 组(P<0.05),CTGF mRNA 相对表达量与 B、E 组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TGF-β1 可促进黄韧带细胞的 CTGF、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原基因及蛋白表达水平增加,TGF-β1 通过 CTGF 协同促进黄韧带细胞增生。

引用本文: 卢昌怀, 刘志军, 张宏波, 段扬, 曹延林. TGF-β1 诱导的黄韧带细胞增生效应及其对结缔组织生长因子的表达影响. 中国修复重建外科杂志, 2019, 33(7): 883-888. doi: 10.7507/1002-1892.201812016 复制

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