• 1. 湖南中医药大学附属常德医院 常德市第一中医医院骨伤科脊柱病区(湖南常德  415000);
  • 2. 南方医科大学珠江医院脊柱外科(广州  510282);
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目的探讨 p38 丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)通路在 TGF-β1/结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)调控人腰椎黄韧带增生肥厚中的作用机制。方法取腰椎椎间盘突出髓核摘除术中获得的黄韧带组织,采用胶原酶预消化组织块培养法分离培养黄韧带细胞。分别用细胞外调节蛋白激酶通路阻断剂 PD98059、c-Jun 氨基末端激酶通路阻断剂 SP600125、p38 通路阻断剂 SB203580 处理黄韧带细胞,实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)检测 CTGF、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原 mRNA 相对表达量。然后取黄韧带细胞分为 A、B、C、D 组,分别以小干扰 RNA(small interfering RNA,siRNA)、p38 siRNA、siRNA+3 ng/mL TGF-β1、p38 siRNA+3 ng/mL TGF-β1 转染细胞,转染 24 h 后行免疫荧光染色观察 p38 和磷酸化 p38(phosphorylation p38,p-p38)表达,qRT-PCR 检测各组 CTGF、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原 mRNA 相对表达量,Western blot 检测各组 CTGF 蛋白表达。结果p38 通路阻断剂 SB203580 可明显降低黄韧带细胞 CTGF、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原 mRNA 相对表达量(P<0.05)。转染 24 h 后,免疫荧光染色显示 A、C、D 组细胞呈阳性反应,有 p38、p-p38 表达,且 C、D 组均强于 A 组;B 组细胞呈阴性反应,无 p38、p-p38 表达。与 A 组相比,B 组 CTGF、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原 mRNA 相对表达量以及 CTGF 蛋白相对表达量显著减少,C、D 组显著增加,C 组较 D 组进一步增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论p38 MAPK 通路介导 TGF-β1/CTGF 表达,在人腰椎黄韧带细胞增生肥厚过程中具有重要作用。

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