刘庆喜 1,2,3 , 陈洪冉 1,2 , 李惠 1,2 , 张同存 1 , 马文建 1,2
  • 1. 天津科技大学生物工程学院(天津 300457);
  • 2. 齐鲁理工学院(济南 250200);
  • 3. 英科博雅基因科技(天津)有限公司(天津 300457);
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目的 从 MCF-7 细胞(人乳腺癌细胞)中培养、分离肿瘤干细胞(cancer stem cells,CST),并研究其对氧化性应激的敏感性。方法 将 MCF-7 细胞在无血清悬浮成球培养基中进行成球悬浮培养,倒置相差显微镜观察细胞形态变化(以 MCF-7 细胞培养液培养的 MCF-7 细胞作为对照)。取直径达 100 μm 的 CST 细胞球(实验组)以及融合度达 70% 的 MCF-7 细胞(对照组),采用免疫细胞化学染色法检测 CST 标志物 CD133 的表达;取直径达 150 μm 的第 3 代肿瘤球细胞,采用流式细胞仪检测其 CD133 阳性率;取直径达 150 μm 的第 2 代肿瘤球细胞(实验组)以及相应代数的 MCF-7 细胞(对照组),采用 50 μmol/L H2O2 损伤 DNA 120 min,采用免疫细胞化学染色方法检测其 DNA 损伤标志物 γH2AX 表达。结果 倒置相差显微镜观察示,MCF-7 细胞最初形态以单细胞贴壁状态生长,经无血清悬浮成球培养基培养后细胞聚集生长,最后形成 CST 细胞球;而经 MCF-7 细胞培养液培养的对照 MCF-7 细胞呈伸展状贴壁生长,不能成球悬浮生长。荧光显微镜观察示,对照组 MCF-7 细胞 CD133 为阴性表达,而实验组肿瘤球 CD133 为阳性表达。流式细胞仪检测示,CST 中 CD133 呈阳性表达,阳性率为 92%。倒置荧光显微镜观察示,实验组 CST 肿瘤球经 H2O2 损伤 120 min 后,其 γH2AX 表达较对照组 MCF-7 细胞明显降低。结论 无血清悬浮成球培养基能够从 MCF-7 肿瘤细胞系培养出成球生长的 CST 细胞,此类细胞具有很强的抗氧化损伤作用。