• 西南医科大学附属医院烧伤整形外科(四川泸州 646000);
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目的制备脂肪间充质干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)与温敏氯化壳聚糖(chitosan chloride,CSCl)凝胶复合物,研究其生物相容性及对大鼠深Ⅱ度烫伤创面修复的可行性。 方法取 SPF 级 6 周龄雄性 SD 大鼠皮下脂肪组织,采用酶原消化并差速贴壁法制备 ADSCs。将 CSCl、β-甘油磷酸钠和羟乙基纤维素按 8∶2∶2.5 比例混合,制作温敏 CSCl 凝胶;采用 Live/Dead 染色和细胞计数试剂盒 8(cell counting kit 8,CCK-8)法观察 ADSCs 在其中的存活和增殖情况。取 SPF 级 8 周龄雄性 SD 大鼠 72 只,采用开水接触烫伤法制备深Ⅱ度烫伤创面模型,随机分为 3 组,每组 24 只,A 组为空白对照组,B 组用温敏 CSCl 凝胶涂抹创面,C 组用 ADSCs/温敏 CSCl 凝胶复合物涂抹创面。术后 3、7、14、21 d 观察创面闭合情况并计算创面闭合率;术后 7 d 行 HE 染色观察炎性细胞数,21 d 行 HE 染色观察新生表皮厚度;同时于术后 7 d 行 CD31 免疫组织化学染色观察新生微血管情况。 结果CSCl 有温度敏感性,4℃ 为液态,37℃ 时成凝胶。Live/Dead 染色和 CCK-8 法结果显示 ADSCs 在温敏 CSCl 凝胶中存活并持续增殖。大体观察示,术后各时间点 C 组创面闭合率均高于 A、B 组(P<0.05)。HE 染色示,术后 7 d,3 组大鼠创面修复进入纤维增生期,各组可见胶原沉积,真皮层可见炎性细胞浸润,C 组炎性细胞数显著小于 A、B 组,B 组小于 A 组(P<0.01)。术后 21 d,B、C 组新生上皮及真皮层纤维结缔组织排列整齐,可见成纤维细胞及新生毛细血管;A 组亦可见新生表皮覆盖,但真皮层纤维结缔组织排列较紊乱,见零星毛细血管。C 组新生表皮厚度显著大于 A、B 组,B 组大于 A 组(P<0.01)。术后 7 d,CD31 免疫组织化学染色示各组均可见新生微血管,C 组大鼠创面新生微血管数显著高于 A、B 组,B 组高于 A 组(P<0.05)。 结论ADSCs/温敏 CSCl 凝胶复合物具有良好的组织相容性,并且能加快大鼠深Ⅱ度烫伤创面修复。

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