• 1. 甘肃中医药大学(兰州 730000);
  • 2. 解放军兰州总医院全军骨科中心(兰州 730050);
  • 3. 宁夏医科大学(银川 750000);
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目的研究 3D 打印技术制备的 β-磷酸三钙(β-tricalcium phosphate,β-TCP)支架负载聚乳酸-羟基乙酸共聚物[poly(lactide-co-glycolide),PLGA]抗结核药物缓释微球的细胞毒性及对 BMSCs 成骨分化的影响。方法通过复乳溶剂挥发法制备异烟肼、利福平/PLGA 缓释微球,3D 打印技术制备 β-TCP 支架,用离心震荡法将微球负载于支架上制备复合材料。采用全骨髓贴壁法分离培养 SD 大鼠 BMSCs,取第 3 代细胞分别与成骨诱导培养液(A 组)、PLGA 抗结核药物缓释微球浸提液(B 组)、3D 打印 β-TCP 支架浸提液(C 组)、3D 打印 β-TCP 负载 PLGA 抗结核药物缓释微球复合材料浸提液(D 组)共培养。采用细胞计数试剂盒 8(cell counting kit 8,CCK-8)法检测细胞毒性;茜素红染色观察钙沉积情况;实时荧光定量 PCR(real time fluorescence quantitative PCR,RT-qPCR)检测成骨相关基因 ALP、骨钙素(osteocalcin,OCN)和骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)的表达。结果CCK-8 法检测示,随培养时间延长 A、B、C、D 组吸光度(A)值逐渐增加;培养 24、48、72 h 时,A 值按 A、C、B、D 组顺序递减,除 B、D 组间比较差异无统计学意义(P>0.05)外,其余各组间比较差异均有统计学意义(P<0 05="" 0="" 2="" 21="" d="" c="">D 组>A 组>B 组。RT-qPCR 检测示,随培养时间延长,A、B、C、D 组 OCN 和 BSP 基因相对表达量均呈逐渐增加趋势;ALP 基因相对表达量于 7、14 d 时呈增高趋势,21 d 时有所降低。培养 7、14、21 d 时 ALP、OCN 和 BSP 基因相对表达量均为 C 组>D 组>A 组>B 组,各时间点各组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论3D 打印 β-TCP 负载 PLGA 抗结核药物缓释微球复合材料对 BMSCs 无明显细胞毒性,同时在一定程度上促进其向成骨细胞分化。

引用本文: 巩栋, 马永海, 杨新乐, 谢卫强, 邵陇龙, 甄平. 3D 打印 β-磷酸三钙负载聚乳酸-羟基乙酸共聚物抗结核药物缓释微球细胞毒性及对 BMSCs 成骨分化影响的研究. 中国修复重建外科杂志, 2018, 32(9): 1131-1136. doi: 10.7507/1002-1892.201803067 复制

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